В соборном храме монастыря хранилась чудотворная икона Божией Матери, подаренная монастырю в 1659 году князем Пожарским, возвращавшимся с войсками в Россию из Литвы. Существует легенда, что икона была спрятана в военном обозе. Когда отряд князя проходил мимо монастыря, «образ стал недвижим» и никакие усилия не смогли сдвинуть его с места. Пожарский понял, что образ желает остаться в монастыре, и передал его игуменье Фотинии Киркоровне. Икона была первоначально помещена в центре Вознесенской церкви, в следующую ночь икона чудесным образом переместилась к стене храма.

На поклонение образу в Борколабовский монастырь стекались паломники не только православного. вероисповедания, но и униаты и католики. Образ прославился чудесами во время Северной войны и войны 1812 года.

Чудотворная икона пережила все войны 17-20 столетий, и все гонения на религию, включая советские времена. В 1882 года Вознесенский храм сгорел, но чудотворный образ, иконостас и утварь были спасены от пожара. После 1920 года Барколабовский монастырь закрыли. Во время Великой Отечественной войны икону сохранили бывшие инокини (по другим устным сведениям, образ находился в часовне на железнодорожной ст. Быхов). В 1953 году перед праздником Пасхи чудотворный образ был принесен в Свято-Троицкий храм в Быхове и помещен в специальный пристенный киот.

Это образ является одним из самых почитаемых образов Божией Матери в Восточной Беларуси. Барколабовская Одигитрия, написанная темперой на хвойной основе с вызолоченным резным фоном, является одним величайших шедевров белорусской школы иконописи, и вместе с тем сохраняет выразительные черты его древне-византийского прообраза. Исследователи высказывают мнение, что образ создан на границе 16-17 столетий, или в 1-й половине 17 столетия в центрально-белорусском регионе (возможно в Слуцке). Иконография близка Иверской и Ильинской (Черниговской) иконам Божией Матери.

Божия Матерь изображена почти поколенно, облачена в темно-пурпурный мафорий, украшенный 3 золотыми ажурными звездами и золотой кружевной каймой с кистями, темно-зеленое платье имеет широкую жемчужную обнизь на горловине и поручах, золотой нимб гравирован лучистым сиянием. Лик Богородицы исполнен царственной красоты, благородства и скорби. Склонив голову к Младенцу, восседающему на Ее левой руке, высоко поднятой вверх правой рукой Она указывает на благословляющую десницу Сына. Младенец Христос, в белом хитоне-рубашке с отложным воротом, препоясанном красным кушаком, и охристо-красном гиматии с обильным золотым ассистом, слегка повернут к Богоматери, благословляет правой рукой, в левой руке держит свиток.

К сожалению не сохранился серебряный позолоченный оклад иконы, который был украшен драгоценными камнями и жемчугом; в серебряной звезде подле ножек Богомладенца находились частицы мощей св. Евфросинии Полоцкой и св. Лонгина. Сохранились сведения о реставрации и частичной переделке оклада в 1868 г.

День празднования образа приходится на 11 июля старого стиля (24 июля н.с.), день его явления в Барколабовском монастыре.

В настоящее время чудотворная икона находится в Свято-Вознесенском женском монастыре возле аг. Барколабово Быховского района.